ELISA试验比色测定关键点解析

　　ELISA试验比色测定关键点解析

　　一、显色反应控制

　　显色时间‌

　　终止反应后需在15分钟内完成比色，避免显色产物降解导致OD值漂移‌。

　　显色剂(如TMB)避光保存，避免光照失效‌。

　　波长选择‌

　　常规检测波长450nm(TMB底物)，若使用OPD底物则选492nm‌。

　　双波长检测(如450nm/630nm)可减少微孔板边缘效应干扰‌。

　　二、仪器校准与操作

　　酶标仪校准‌

　　开机预热30分钟，使用标准滤光片校准波长准确性‌。

　　空白孔调零时需确保无气泡残留，避免光路误差‌。

　　加样精度‌

　　枪头悬空加样至孔底，避免触碰孔壁或液体飞溅‌。

　　显色剂与终止液需按说明书体积精确加入(如50μL/孔)‌。

　　三、数据可靠性保障

　　重复性控制‌

　　标准品与样本均需设置复孔(建议2-3孔)，CV%应<15%‌。

　　手工洗板时拍干力度需均匀，避免残留液体影响OD值‌。

　　异常值处理‌

　　边缘孔OD值偏高时，建议将质控孔置于板中央‌。

　　显色异常(如白板/高背景)需排查试剂活性或封闭条件‌。

　　四、常见问题解决方案

　　假阳性‌：溶血样本需离心去除，类风湿因子干扰可添加阻断剂‌。

　　假阴性‌：避免反复冻融样本，竞争法需严格按顺序加样‌。

　　注：仅供科研使用，以上资料供参考，如需具体产品说明请咨询技术老师或品牌供应商。

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